医院这边的子弹,且让它先飞一会儿。
回学校推进科研项目去。
重症急性胰腺炎的论文已经发出,接下来的重头戏,是RNA早筛。
这玩意做出来,是真正能撼动全世界的核武器,更是他前世今生执念的所在:
——攻克胰腺癌,从极早期的精准筛查开始。
返回南医大的公交车,江河在项目组的QQ群里发了一条消息。
“所有人,一小时后,实验室开会。”
实验室。
江河进去的时候,众人都乖巧坐着。
“老大。”易向晚道,“你不是上班么?怎么这会儿就回来了?没有迎新聚餐什么的?”
“聚餐没有,倒是给我排了十五张重症床位。”
“啊,十五张?附一院现在把新人当牲口使啊?”
“没事,不用管医院那边,今天喊你们过来,是因为我们前期收集的几百份冻存血清样本已经全部到位了,RNA早筛项目,从今天开始,正式进入湿实验阶段。”
此话一出,几个人的神色瞬间变得严肃。
跟江河混了这么久,他们很清楚这个项目的分量。
江河从包里拿出一沓打印好的A4纸,分发给众人。
“这是我这两天做出来的实验方案,大家先看一看。”
众人接过方案,低头翻阅。
江河:“这个项目的前景有多大,我以前跟你们说过,但我今天必须给你们打个预防针,这个过程,会极其枯燥,且充满挫折。”
“简单来说,我们要在血液里,找到与肿瘤相关的RNA,目前,针对血清RNA的商业化提取试剂盒还不够成熟,我们只能用最基础的方法来做。”
江河站起身,走到白板前,拿起马克笔画了一个简单的流程图。
“第一步,RNA提取,这是最耗时的一步,也是你们未来几个月每天都要重复的工作。”
“我们手头有近六百份血清样本,我要求你们使用Trizol LS试剂法来进行提取,因为血清中本身存在大量的RNase(核糖核酸酶),如果不迅速裂解,我们的目标RNA就会降解得一干二净。”
“记住几个内核要点。”
“第一,绝对的无酶环境,我们的枪头、EP管必须是去RNA酶处理过的,台面每天实验前用RNaseZap喷洒后,再用DEPC水擦拭。”
“第二,加氯仿后的相分离,离心完,吸取上层水相的时候,手千万不要抖,哪怕少吸一点水相,也绝不能吸到中间的白色蛋白层,一旦污染,后面的数据全废。”
唐培认真地在方案上做着笔记:“老大,提取完之后呢?”
“提取完之后,是逆转录(RT)和实时荧光定量PCR(qPCR)。”
江河写下了一个数学公式。
“这是相对定量的计算公式,但因为RNA太短了,只有大约22个核苷酸,传统的随机引物根本无法对其进行逆转录,所以,我们需要在逆转录之前,进行Poly(A)加尾,或者使用特异性的茎环(Steloop)引物。”
“现阶段,我们用最基础的加尾法,这些长周期、重复性的基础提取和建库工作,我今天全部分配下去,两人一组,轮班倒,一个月内,我要看到这六百份样本的A文库全部创建完毕,听明白了吗?”
顾亦舟严肃点头:“没问题老大,交给我们。”
江河看着手里的实验方案,突然想到副院长张随。
在08年,全球范围内在RNA循环标志物领域走得最
他们是江河这个项目在国际上最大的竞争对手。
想要在国际顶刊上抢发标准,光有数据有时候是不够的。
如果能借用张随在霍普金斯大学的人脉网络,比如让他作为通信作者之一与国外同行进行学术沟通。
不过,这些都是后话。
打铁还需自身硬,先把数据跑出来再说。
江河收回思绪。
“好了,戴上手套,我现在带你们做第一批样本的提取演示,所有人盯紧我的操作细节。”
接下来的两个小时,实验室里热火朝天。
江老师事无巨细,教程非常认真。
添加Trizol LS,添加氯仿,4度离心机设置。
围观的几个人眼睛都不眨一下。
他们跟着江河做了几次科研了,举手投足间已经有了一丝老实验员的沉稳。
演示结束,江河将样本放进-80度超低温冰箱。
“就按这个标准来,今晚先做十个样本练手,明天下班我会过来查你们的纯度数据。”
“休息十分钟。”
休息时间。